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荧光显微镜滤镜

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荧光显微镜是一种光学显微镜,它使用荧光代替或补充散射、反射、衰减或吸收来研究有机或无机物质的性质。“荧光显微镜”是指任何使用荧光生成图像的显微镜,无论是像epifluorescence显微镜这样简单的设置,还是像共聚焦显微镜这样更复杂的设计,后者使用光学切片来获得更好的荧光图像分辨率。

荧光显微镜需要荧光滤镜,通常在荧光滤镜立方体中组合三个滤镜,可以使用不同的光源和荧光素观察不同的细胞。用于荧光显微镜的滤光片需要合适的阻挡密度OD值、高信号强度和高对比度。

图1:荧光显微镜的光路

荧光滤光片的描述

荧光显微镜根据所需波长来选择滤光片。大多数荧光显微镜是使用荧光结构进行工作的。术语epifluorescence是指通过同一物镜的激发和发射。这种结构的优点是大部分激励都远离探测器。此外,在同一位置可以观察到激发。即使大部分的激发光通过样品,也有相当一部分的光被反射或散射回物镜。

图2:FISH-Aqua+cube
图3:FISH-Green+cube

荧光显微镜滤光片设计的主要目标是最大限度地提高图像对比度并保持图像质量,以帮助科学家,工程师和研究人员使用Optolong荧光滤光片。主滤光元件在一个epifluorescence显微镜系统里面是一套,包含三片滤光片,安置在一个荧光立方体cube中,分别是激发滤光片,发射滤光片,和二向分色镜。

Optolong多带通荧光滤光片DAPI-Green-Orange + Olympus BX61

荧光显微镜系统中,每片荧光滤光片的用途简介

激发滤光片通常用于荧光显微镜和光谱应用,用于选择来自光源的光的激发波长。大多数激发滤光片从激发光源中选择波长相对较短的光,因为只有这些波长会携带足够的能量使显微镜检查的物体发出足够的荧光。激发滤光片主要有两种类型:短通和带通型。

发射滤光片(又名阻截滤光片或发射器)衰减所有通过激发滤光片传输的光,并非常有效地传输由样品发出的任何荧光,同时阻塞不需要的杂光。这种光的波长总是比激发波长更长。发射滤光片可能有两种主要类型-长通和带通型。

除激发和发射滤光片外,荧光显微镜还需要一个二向分色镜。二向分色镜允许某一波长的光通过,而其他波长的光则被反射。二向分色镜控制需要波长的光进入对应的激发或者发射滤光片。

这三片荧光滤光片通常一起被装在对应显微镜型号的cube里面,以便将组一起插入显微镜中。

用于荧光成像的荧光滤光片

荧光滤光片用于光学荧光成像系统中观察,也可以用于使用探测器捕捉高质量图像。根据不同的目的,可以选择不同的荧光滤光片,如:

  • 增加对比度
  • 阻挡环境光线
  • 去除有害的紫外线或红外线
  • 选择性地省略或传输特定波长的光(如激发光)
  • 修正光路问题
  • 降低光强度
图4:Subjects moss sporangium, Optolong LP-DAPI+Olympus BX 52
XY-Chim2 PN33011 DAPI/Green/Orange,Olympus BX61
图5:Fluorescence-In-Situ-Hybridisation of chromosomes,Optolong PN33011 DAPI/Green/Orange+Olympus BX61
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